色譜柱的新手使用問題解答：
 

　　1.對于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？
 

　　答：新柱活化，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因為分子量高的物質(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。
 

　　如果要加快平衡時間，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。
 

　　2.測定多肽，一般采用什么柱子？流動相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子？
 

　　答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
 

　　3.氨基柱在進(jìn)酸性樣品時，很傷柱子，如使用一段時間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)？
 

　　答：氨基柱測酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
 

　　4.色譜柱的技術(shù)都有哪些？比如封尾等，這些技術(shù)在應(yīng)用時都體現(xiàn)在哪里？
 

　　答：色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗積累。
 

　　國內(nèi)和國外想比，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國內(nèi)公司以前都不會自己開發(fā)填料，一般買國外現(xiàn)成填料裝柱，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外因為裝柱歷史短，經(jīng)驗積累少，裝柱工藝也沒有達(dá)到較高水平。另外，對色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠，國產(chǎn)的還不過關(guān)，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比，差距很大。
 

　　5.色譜柱技術(shù)的差距在哪里？
 

　　答：液相色譜柱裝填實際上是有一定技巧和程序，可能還有一些運氣。一般使用高壓勻漿方法裝填。也是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實，這實際上用到了不同比例的勻漿液體，和合適的壓力。壓力太大，顆粒破碎，壓力太小，塔板數(shù)少。同時壓力需要穩(wěn)定，不然分布不均，拖尾嚴(yán)重。同時還有頭上平整程度。套上套，可以用了。